應(yīng)用固相萃取技術(shù)時的注意事項

 　　應(yīng)用固相萃取技術(shù)時的注意事項
　　1. 盡量慢
　　我們在用固相萃取時，面臨的一個問題就是：液體應(yīng)該以什么速率過柱流出，我的經(jīng)驗是，要想效果好，就要慢，盡量慢。
　　對于固相萃取柱中的填料，我們?nèi)绻植糠糯蟮乜?，能夠看到其實它們是有很多的空隙，液體流通的渠道很多，如果流得快，相當(dāng)比例的待測組分還來不及與填料充分作用就地從通道流失;所以要慢，給它們一個充分作用的機會。
　　如何慢呢?一個竅門就是不要用配合抽氣機使用的所謂固相萃取器，而采用再普通不過的重力法。利用重力的作用使液體向下流出。在實驗速度上，重力法遠(yuǎn)不如吸力法，但是在實驗效果方面，重力法遠(yuǎn)比吸力法優(yōu)勝，用吸力法只能得到譜帶吸附，用重力法卻能得到柱頭吸附，在速度和效果兩者的平衡中，我們還是傾向于優(yōu)先保證好的效果。
　　舉例來說，一個3 ml 500mg的C18小柱，如果加甲醇活化，其甲醇全部流至篩板時間約為20 分鐘，而在過樣品液時，25ml的液體zui多2 小時可以流完，而且用重力法如果得當(dāng)，工作速率不一定比吸力法差很多。因為我們可以充分利用空閑時間，用吸力法必須有人在旁邊守候，而重力法由于不需要用電，可以充分利用午休和晚上時間過柱，液體量大時接個堆疊接頭和延長管即可，安排好實驗步驟，工作效率一樣很高。另外，重力法不需要抽氣機和固相萃取器。
　　2. 盡量少
　　在固相萃取條件選擇上，有人為了提高提取效率，盡量多加液體，或選擇填料量大的小柱，我覺得大可不必如此。尤其在用重力法時，由于效率高，很多情況下是柱頭吸附，并不是所有的填料都在起作用，填料多了不僅液體流出速度會更慢，而且在洗脫時的擴散會很明顯。
　　因此建議，夠用就行，在能保證效率時，填料盡量少，加液也不宜多。
　　3. 實驗條件不宜過分細(xì)化
　　固相萃取從原理上是色譜分離，但是在操作時只把它作為吸附萃取劑使用，由于填料性質(zhì)、松緊常有差異，因此在實際實驗中不必因為追求效果的*化而設(shè)計出很復(fù)雜的洗脫程序。
　　在建立條件中，我們應(yīng)該盡量多利用現(xiàn)成的資料，盡快地建立起體系，同時要對操作過于復(fù)雜的步驟保持警惕性，在實驗效果，實驗速率和易操作性三者中取得平衡點。
　　4. 只用一次
　　固相萃取柱只用一次。因為從嚴(yán)格的意義上來說，很多物質(zhì)的吸附是不可逆的，一次吸附，無法洗脫，影響著下一次吸附，雖然有人做過重復(fù)利用的實驗，但是總體來說為了節(jié)省一點經(jīng)費而大大增加了結(jié)果的不可靠性和不確定性，是很不合算的行為。
　　因此建議，只用一次。如果想節(jié)省經(jīng)費可以從減少填料量和使用小容積管入手，盡量用堆疊接頭和延長管。
　　5. 慎用固相萃取器
　　所有的供應(yīng)商都會在推薦固相萃取柱的同時，推銷固相萃取器，zui簡單的固相萃取器也要幾千，如果貼個進口商標(biāo)價格更要加幾倍，這樣的價格還不包括抽氣機。但是這樣的配置就是再加上調(diào)速開關(guān)，也很難得到好的結(jié)果，主要問題就是把小柱的不平行性放大了。
　　建議：實在不適合重力法的才用固相萃取器。
　　至于全自動固相萃取器，應(yīng)該說，現(xiàn)在市面上還沒有比較理想、適合食品檢測的機器，主要問題就是無法解決一批小柱中液面下降不一致的問題，加上價格很昂貴，性價比也自然不高。帶液面測量的也不能對多批量的小柱同時檢測，且有交叉污染的危險。
　　目前的全自動固相萃取器基本上是走重力法路線，倒是回避了密封的難題。
　　6. 不可忽視傳統(tǒng)的液體萃取
　　有些人在初次接觸固相萃取時，總覺得它能取代液體萃取，實際上就象毛細(xì)管電泳無法取代液相色譜一樣。固相萃取在某些場合比液體萃取合適，但是在更多情況下，還是傳統(tǒng)的液體萃取更可靠更合適。這一點從目前實驗技術(shù)的實際發(fā)展可以得到印證。
　　關(guān)于液固萃取，我們不要僅僅把它看作是一個提取過程，從另一個角度來看，它還是一個凈化過程，是把固形干擾物排除凈化的過程。理解這一點，有助于我們優(yōu)化選擇實驗方法。
　　7. 實用性是實驗設(shè)計成功與否的zui終準(zhǔn)繩
　　在設(shè)計一個實驗時，開始要考慮到其技術(shù)上是否先進。而在實際運用中，zui終決定這個方法是否可行，是否能夠存在的關(guān)鍵是實用性。一個實驗方法不僅要解決問題，而且能夠在人力，物力，財力三方面達到平衡，且滿足可持續(xù)、可重復(fù)操作的要求。